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  • 1. 大肠杆菌是重要工业菌株之一,其培养过程可分为快速生长期和生长稳定期两个阶段。为了通过调节蛋白质合成与降解速率来动态调控代谢途径关键酶的蛋白量,使细胞适配不同阶段的生产需求,研究者设计了两种质粒,并以稳定性好的红色荧光蛋白mKate2为模式蛋白,测试质粒功能。

    回答下列问题:

    1. (1) 研究者首先构建质粒①(图a)用于在细胞内表达C-末端带SsrA短肽的mKate2,将质粒导入感受态细胞后,在添加抗生素的选择培养基上培养。根据培养基上菌落的生长状况,结合PCR及检测,筛选获得重组菌株W1.

    2. (2) 将W1在适宜条件下进行摇瓶培养,定时取样检测培养液中细胞密度,方法有(答一种)。接种前需检测液体培养基的荧光强度,其作用是。培养结果(图b)表明,进人生长稳定期后荧光强度快速下降,原因是

    3. (3) 研究者选用启动子Px、X基因(编码阻遇蛋白X,阻遏Px开启转录),重新构建质粒②(图a),导人野生型大肠杆菌中获得重组菌株W2。在适宜条件下摇瓶培养,W2的生长趋势不变,培养期间荧光强度的变化趋势为
    4. (4) 莽草酸是一种重要工业化学品,其胞内合成代谢途径见图c。由于野生型大肠杆菌胞内酶A活性弱,且莽草酸会被快速转化为细胞生长必需物,因此细胞中无法大量积累莽草酸。为了保证细胞正常生长,并在生长稳定期实现莽草酸的大量积累,利用上述两种质粒的调控功能,结合野生型菌株遗传物质的改造,提出重组生产菌株构建思路: